[의학,약학] [미생물experiment(실험)] PURIFICATION OF PLASMID DNA(bacteria의 plas…
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작성일 24-01-05 21:06
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T-vector는 이름에서 볼 수 있듯이 직선형 DNA의 양끝에 overhang(DNA가 2가닥인데 한가닥만 돌출되어있다)으로 T서열을 가지고 있따 이렇게 양끝에 T를 넣어준 이유는 Taq polymerase(PCR용 DNA중합효소)를 이용해서 PCR을 한경우 원하는 서열 양끝쪽에 overhang으로 추가로 A 서열이 만들어지기 때문일것이다 이 상태의 DNA를 연결ligation하여 변형transformation 시킨다. 사용하기 편하며 ligation 효율도 높다. 이때 플라스미드는 유전자를 운반하는 역할을 하기 때문에 벡터 (vector 운반체)라고 불려진다…(skip)
다.- Promega pGEM-T easy kit의 특징Rapid ligation solution을 가지고 있어서 보통 ligation하는데 16시간 정도 걸리지만 이것을 이용할 경우 1시간에서 3시간이면 reaction response이 끝나서 시간을 절약할 수 있어서 편하다. vector가 주로 circular form의 plasmid인데 비해 이것은 직선형이다.
2) 방법Bacterial culture tube에 LB(일반영양배지 Luria Bertani) broth(액체배지)와 antibiotic(항생제)가 포함되어있는 곳에 재조합된 bacteria의 single colony를 picking하여 접종한 후 배양한다 bacterial cells로부터 plasmid DNA를 소량으로 분리하는 방법으로 alkaline lysis procedure을 이용한다.
실험과제/생물의학
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PURIFICATION OF PLASMID DNA
1. subject
bacteria의 plasmid에 대해 알아보고 DNA의 구조에 의한 추출 원리를 이해한다.2. introduction
가. plasmid세균세포내에서 염색체와 독립적으로 존재하며 증식할 수 있는 환형DNA. 모든 플라스미드는 복제 개시점이 될수 있는 적어도 한 개의 DNA염기서열을 가지며 큰 플라스미드는 자체에 복제 효소를 가지기도 한다. 숙주 내 플라스미드의 증식에 따라서 필요한 유전자가 복제되고 유용한 물질들이 합성된다된다. pGEM-T vectror1) T-vectorT-vector는 PCR을 마친후 증폭된 DNA의 절편을 보관이나 다른 용도에 편하게 쓸 수 있도록 만든 것이다.
라. plasmid 를 추출하는 일반적인 방법
1) 기본원리 세포내에 DNA는 일반적인 double-helix를 형태를 가지는 반면 plasmid는 supercoiled형태를 가짐으로써 PH의 變化에 따라서도 plasmid의 형태 와 구조가 크게 변하지 않는 것을 이용하여 순수한 plasmid만을 추출하는 구조적 기본원리에 의한 방법이다. 여기서 SDS는 bacterial proteins을 변성시키며 NaOH는 chromosom
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[의학,약학] [미생물experiment(실험)] PURIFICATION OF PLASMID DNA(bacteria의 plasmid에 대해 알아보고 DNA의 구조에 의한 추출 원리를 이해)
다. Plasmid DNA는 plasmid를 지니고 있는 bacteria에서 적은 양의 배양으로 분리될 수 있따 Bacteria는 sodium dodecyle sulfate(SDS), NaOH를 함유하는 용액으로 처리하여 용균되어 진다.
