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[의학/일반생물학] 4. Macromolecules: Proteins, Carbohydrates, Lipids

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작성일 23-05-10 04:12

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세포를 이루고 있는 생체 거대분자의 존재를 생화학적인 test(실험) 방법을 통해서 확인하고 이들의 양을 정량 하는 기술을 습득한다.
4. test(실험) 방법

5. test(실험) 결과 및 토의

목차:
-BSA (Bovine Serum Albumin, Sigma)을 농도가 1 mg/ml이 되게 만든다.

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1) STD 흡광도 측정(測定)
1. test(실험) 목적
-50 ml의 95% 에틸알코올에 100 mg의 Coomassie Brillant Blue G-250을 녹인다. 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하므로 정량이 가능하게 되는데, 이 방법은 발색 reaction 이 2분이내에 완결되며 1시간까지 안정성이 유지된다된다.
거대분자의 관찰에 관한 리포트입니다.
-여기에 85% phosphoric acid 100 ml을 넣고 잘 섞는다.

1) Protein reagent (Bradford reagent)

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4)Further Study

설명
5) 595 nm의 파장에서 먼저 standard solution의 흡광도를 측정(測定) 하여 기록하고, 시료의 흡광도를 측정(測定) , 기록한다. Bradford 방법은 빠를 뿐만 아니라 비단백질 成分들에 의한 방해도 거의 없다.
2) 1)에 물 1000㎕와 Bradford reagent를 500㎕ 넣고 천천히 섞어준다.
일반생물학 및 실험1에서 쓴 레포트입니다.

4) 발색이 되도록 약 5분 정도 기다린다 (단, 30분을 넘지 않는다).

6. Reference

4) Milk, Unknown Protein

3. test(실험) 기구 및 재료
3) Spectrophotometer와 Quartz cuvettes.

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6) Standard의 흡광도 수치를 이용하여 standard curve를 그리고 이 curve 에 맞추어 모르는 시료 안의 단백질의 양을 거꾸로 계산한다.
1. test(실험) 목적
순서

생물실험, 단백질, 탄화수소, 생체 거대분자, 브래드포드 방법, bradford method,
2. test(실험) 원리
3. test(실험) 기구 및 재료
2) 미지의 protein 용액, 우유의 test(실험)
2) Protein Standard

2. test(실험) 원리
-증류수를 넣어서 총량이 200 ml이 되게 한다 (이 농축 염색약은 4 ℃에서 약 6개월 동안 보관가능). 실제 시료에 넣는 염색약은 중류수 4 volume을 넣은 희석 염색약을 사용한다. Bradford 방법의 감도는 Lowry 방법보다 좋으며, 미량 정량법(microassay)을 사용하면 1~20mg의 단백질량을 측정(測定) 할 수 있다.
다.
3) 25μl의 측정(測定) 오차에 대하여
1) 단백질의 양을 알고 있는 standard solution (1 mg/ml BSA, bovine serum albumin)을 0, 5, 10, 15, 20, 25μl씩 분주한다.

4. test(실험) 방법
Bradford Method: 단백질에 발색제를 가하여 가시광선 영역의 흡광도를 측정(測定) 하는 정량법이다.

일반생물학 및 실험1에서 쓴 리포트입니다. 산성용액에서 Coomassie Brilliant Blue 염료는 단백질과 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대흡광도는 465nm에서 595nm로 이동하게 된다된다. 몇 가지 방해成分이 있으면 결과가 정확하지 않게 되는데, 알려진 방해成分으로는 Triton X - 100 과 황산도데실나트륨(SDS)이 있다. 거대분자의 관찰에 관한 레포트입니다.

레포트 > 자연과학계열
3) 단백질 양을 모르는 unknown protein과 milk를 각각 5, 10, 20㎕씩 분주하고 ⑵를 반복한다.

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